Cellworld DMEM培養(yǎng)基(低糖)是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時(shí)又分為高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個(gè)位置生長,適于生長較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。
DMEM是dulbecco's modified eagle medium的縮寫,所以其特點(diǎn)主要包括以下:
(1)氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;
(2)維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍;
(3)含有糖酵解途徑中的重要物質(zhì)--丙酮酸;
(4)含有微量的鐵離子。
Cellworld DMEM培養(yǎng)基(低糖)主要有以下用途:用于成纖維細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞(SP2/0)、表皮喉癌細(xì)胞(HEP-2)、Hela(宮頸癌細(xì)胞)、CHO(中國倉鼠卵巢細(xì)胞)等細(xì)胞的培養(yǎng),用于疫苗企業(yè)病毒株的傳代培養(yǎng)供后續(xù)抗原的制備,用作動物疫病病毒采樣及病毒分離和維持液的基礎(chǔ)液、免疫治療用細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)液以及人病毒分離用生長液及維持液的基礎(chǔ)液。
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1NNaOH和1NHCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用DMEM低糖(含雙抗)紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到滅菌的目的。
根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。