再經(jīng)內(nèi)毒素清除液清洗,可將絕大多數(shù)菌體內(nèi)毒素清除干凈,然后通過清洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì),最后在低鹽、高pH條件下洗脫得到高純度無內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。
去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒提取的質(zhì)粒DNA,可用于常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)外,還適合細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
質(zhì)粒(plasmid)是獨(dú)立于染色體外的雙鏈閉合環(huán)狀DNA分子,大小范圍為0.8~120kb,具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力,常以超螺旋狀態(tài)存在,廣泛存在于細(xì)菌、放線菌和真菌中。質(zhì)粒作為基因工程的常用載體,能夠?qū)⒛康幕蛲ㄟ^DNA重組技術(shù)轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞中。
內(nèi)毒素(Endotoxin)最早于十九世紀(jì)由RichardPfeiffer在研究發(fā)熱物質(zhì)過程中發(fā)現(xiàn)并提出。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外膜上的*結(jié)構(gòu),其主要化學(xué)成分是脂多糖。脂多糖由核心寡糖、雜多糖鏈、菌株特異性O(shè)抗原和疏水的脂質(zhì)A組成,其中脂質(zhì)A是其主要的活性位點(diǎn)。
由于試驗(yàn)?zāi)康牟煌|(zhì)粒DNA的質(zhì)量也有不同的要求,尤其是在細(xì)胞轉(zhuǎn)染的過程中,質(zhì)粒中的內(nèi)毒素水平會(huì)明顯影響細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,所以對(duì)質(zhì)粒的質(zhì)量要求更為苛刻。而面對(duì)市售的種類繁多的質(zhì)粒DNA提取試劑盒,正確的選擇會(huì)成為試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。
無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提中量試劑盒的特點(diǎn)如下:
1.快捷、高效:操作簡(jiǎn)便,得率高,節(jié)約時(shí)間;
2.純度高:沉淀致密,去雜干凈;
3.內(nèi)毒素去除簡(jiǎn)單:柱上去除內(nèi)毒素,方便快速,清除干凈。