HyClone胎牛血清是常見的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基營養(yǎng)液,在大部分試驗(yàn)中是不需要對HyClone胎牛血清中的脂肪酸進(jìn)行去除的,但是,在進(jìn)行某些特殊細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候?yàn)榱吮WC實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和我們要讀胎牛血清中的某些成分進(jìn)行去除,常見的脂肪酸去除,我們一般用一下方法。
1.溶解。取適量的胎牛血清白蛋白提取物,溶解于10倍的蒸餾水中,溶解溫度在23~27℃。 用濃度為0.2N的HCl,調(diào)節(jié)PH至3~3.5。
2.解析。充分溶解后的溶液胎牛血清白蛋白移至冰水混合物中進(jìn)行冰水浴,同時(shí)持續(xù)攪拌,維持30min。
3.吸附。加入5%的活性炭,混勻,混懸液將混懸液移至冰水混合物中進(jìn)行冰水浴,同時(shí)持續(xù)攪拌,維持1小時(shí)。過濾,濾渣回收后再利用。
4.濃縮。 濾液用0.2N的NaOH調(diào)節(jié)PH值至7.0,然后用20000分子量以下的超濾器進(jìn)行超濾濃縮。
5.凍干。將濃縮液按凍干曲線凍干,即將超濾后的濃縮液迅速冷凍至-40℃,持續(xù)1小時(shí)左右,升到-25℃,持續(xù)10~20小時(shí),再緩慢升溫至0℃,維持1~4小時(shí),升溫至保存溫度20℃,分裝為成品。